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最小抑菌浓度测定:尊龙凯时琼脂与肉汤稀释法对比

发布时间:2025-03-09   信息来源:尊龙凯时官方编辑

在生物医疗领域,稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)是一种评估抗菌剂抑制微生物生长能力的重要实验技术。该方法主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法,具备显著的实用性和可操作性。

最小抑菌浓度测定:尊龙凯时琼脂与肉汤稀释法对比

琼脂稀释法因其操作简便、成本低、适合高通量筛选而受到广泛应用,尤其适合于自动化操作和精确控制药物浓度。此方法通过将不同浓度的抑菌剂混合溶解在琼脂培养基中,再点种细菌,以观察细菌的生长情况来确定抗(抑)菌物质抑制受试菌生长的最低浓度,即最小抑菌浓度(MIC)。此方法尤其适用于不溶性抗(抑)菌产品。

操作步骤如下:

  1. 抗(抑)菌溶液的配制:在无菌条件下取5ml或5g样品,放入45ml灭菌的磷酸缓冲液中,充分震荡溶解,制成10%的均匀分散液。
  2. 含抗菌剂的培养基配制:将10%的抗(抑)菌溶液用PBS进行系列稀释,置于45℃至50℃的恒温水浴中备用。
  3. 双倍浓度培养基制备:称取76g MH琼脂培养基并溶解于1000ml水中,煮沸后进行121℃下压力蒸汽灭菌15分钟,置于45℃至50℃水浴中备用。
  4. 混合抗(抑)菌液与培养基:分别取10ml系列稀释的抗菌液和10ml双倍MH琼脂培养基,混合均匀,待凝固后备用。
  5. 接种菌液:用加样器取1μl至2μl的菌悬液点种于含抗(抑)菌液的培养基中,确保接种后形成的菌液圈直径为5mm至8mm。
  6. 作为阳性对照,接种不含抗(抑)菌成分的MH琼脂平板。
  7. 将接种后的平板放入35℃培养箱中倒置培养18至24小时以观察结果。

评判标准为:若菌落生长完全被抑制的最低抗(抑)菌浓度则为样品对受试菌的MIC。

营养肉汤稀释法同样用于确定最小抑菌浓度(MIC),但更适合可溶性抑菌产品。操作步骤如下:

  1. 配制已培养的细菌悬液,例如金黄色葡萄球菌或大肠杆菌。
  2. 含抗菌剂培养基的配制:将抗(抑)菌溶液用蒸馏水系列稀释,取各稀释度的25ml加入含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
  3. 取0.1ml含约108cfu/ml的菌悬液接种至含抗(抑)菌剂的营养肉汤试管中。
  4. 同样方法接种不含抗(抑)菌剂的营养肉汤作为阳性对照。
  5. 准备含营养肉汤的阴性对照组样本。
  6. 将所有试管置于37℃培养箱中培养48小时,观察结果。

评判标准为:当阳性对照试管有细菌生长(混浊),阴性对照试管无菌生长(透明),且实验菌悬液浓度为5×105cfu/ml至5×106cfu/ml时,试验组无菌生长的最高稀释度所对应的抗(抑)菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。

在此基础上,采用尊龙凯时品牌的先进技术,可以进一步提升抗菌实验的准确性与便捷性,为生物医疗领域的发展提供更有力的支持。